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大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒

英文名稱:Rat IL-18BP ELISA Kit
實驗類型:夾心法
檢測範圍:6.25 pg/mL – 200 pg/mL
最低檢測限:1.0 pg/mL
應用範圍:血清、血漿、組織勻漿、細胞培養物上清或其它相關液體(本産品僅供實驗室科研及非臨床用途)
産品介紹
實驗目的/有效期 實驗原理 ELISA試劑盒組成
樣本處理及要求 需要而未提供的試劑和器材 試劑準備
操作步驟 注意事項 洗闆方法
實驗結果計算 ELISA試劑盒性能  

 

大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒僅供研究使用

 

大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒實驗目的


本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠白介素-18結合蛋白(IL-18BP)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

 

 

 

實驗原理


試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠白介素-18結合蛋白(IL-18BP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顔色的深淺和樣品中的大鼠白介素-18結合蛋白(IL-18BP)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

 

 

 

大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒組成


試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
微孔酶标闆 8孔×12條 8孔×6條  無
标準品 0.3mL×6管 0.3mL×6管
樣本稀釋液 6mL 3mL
檢測抗體-HRP 10mL 5mL
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL
底物B 6mL 3mL
終止液 6mL 3mL
封闆膜 2張 2張
說明書 1份 1份
自封袋 1個 1個

備注:

1. 标準品濃度依次為:200、100、50、25、12.5、0 pg/mL

2. 經過大量正常标本檢驗,标本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍内,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大标準品濃度時,可用樣本稀釋液将标本進行适當稀釋後再進行實驗。

 

 

 

樣本處理及要求


1. 血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過夜後于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,标本采集後30分鐘内于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物标本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。

注:标本溶血會影響最後檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。

 

 

 

需要而未提供的試劑和器材


1. 酶标儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

 

 

 

試劑準備


試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

 

 

操作步驟


1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需闆條,剩餘闆條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置标準品孔和樣本孔,标準品孔各加不同濃度的标準品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)标記的檢測抗體100μL,用封闆膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗闆5次(也可用洗闆機洗闆)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min内,在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

 

 

注意事項


1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準确結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。

2. 洗闆不正确可以導緻不準确的結果。在加入底物前确保盡量吸幹孔内液體。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除闆底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顔色,已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和标本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷闆條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期産品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

 

 

 

洗闆方法


手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。根據需要,重複此過程數次。

自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。

 

 

 

實驗結果計算


以所測标準品的OD值為橫坐标,标準品的濃度值為縱坐标,在坐标紙上或用相關軟件繪制标準曲線,并得到直線回歸方程,将樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

Elisa試劑盒标準曲線圖

(此圖僅供參考)

 

 

 

大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒性能


1. 檢測範圍:6.25 pg/mL – 200 pg/mL。

2. 靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重複性:闆内變異系數小于10% ,闆間變異系數小于15% 。

 

 

産品關鍵字:大鼠白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA試劑盒 大鼠白介素18結合蛋白 ELISA試劑盒 大鼠(IL18BP)ELISA試劑盒

聲明:本網站出售的所有産品,僅用于科研實驗用,不做它用。
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